※ 引述《LabMumi (LaborMumi)》之铭言
: https://i.imgur.com/7Qcnz8s.jpg
: 姆咪
: 为蛇摸又有人说ct过30会验不到
: 不是多跑几轮循环多*几次2就好了吗
: 有没有卦
首先PCR大致分成三步骤
1.DNA变性(Denaturation)，利用高温使DNA模板变单股；
2.引子黏合(Annealing)，降低温度让引子黏合到模板上；
3.引子延长(Extension)，以适当的温度让聚合酶沿模板合成新的一股DNA片段。
https://i.imgur.com/FsNXZMp.jpg
这个网络上查都有
然而重点在于设计的这个primer
primer能不能夹出目标的DNA片段就要看各厂商的功夫了
通常依夹的目标跟用途不同
primer的长度设计在15-数百mer之间
primer的长度跟黏合时的环境温度决定了primer的准确性
并且更深入来说
越长的primer以及越多越久的复制次数则导致了primer乱黏的情形发生
乱黏 就会在错误的地点乱复制
复制出来就不是我们想要的
顺带一提
现在常用的所谓的PCR
是real time pcr
https://i.imgur.com/A7MRsGI.jpg
跟传统PCR不同于呈现及定量的方式
传统PCR在复制40次左右后还要拿出来跑胶才能知道片段大小及浓度高低
real time pcr透过特别设计的探针来达到目标DNA发光的效果
然后再透过一起纪录吸光值
https://i.imgur.com/qXdsqVp.jpg
看图说故事 很简单吧
但要注意的是
因为冠状病毒是RNA病毒
所以第一部要先将单股RNA 反转录成cDNA
才能往下做实验
不过这不是重点